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1、脫保護：將連接在固相載體CPG上核苷酸與三氯乙酸反應，脫去其5'-OH的保護基團DMT，獲得游離的5'-OH。 2、耦連：將亞磷酰胺保護核苷酸單體，與活化劑四氮唑混合，得到核苷亞磷酸活化中間體，它的3'端被活化，5'-OH仍然被DMT保護，將活化好的中間體與溶液中游離的5'-羥基發(fā)生縮合反應。 3、蓋帽：縮合反應中可能有極少數5'-羥基沒有參加反應(少于2%)，用乙酸酐和1-甲基咪唑終止其后繼續(xù)發(fā)生反應，這種短片段可以在純化時分離掉。 4、氧化：在氧化劑碘的作用下，亞磷酰形式轉變?yōu)楦€(wěn)定的磷酸三酯。當天120bp引物第二天均可發(fā)貨！

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